本发明涉及一种芝麻油中芝麻素的分离方法。该方法可使芝麻油中大量的甘油三酯等脂肪类成分冻结沉淀，而芝麻素与芝麻林素溶解在特定溶剂中，从而使芝麻素、芝麻林素与大量的甘油三酯等脂肪类成分分离，同时低温操作也保证了芝麻油品质几乎不受影响。然后，在低温下抽滤得到主要含芝麻素和芝麻林素的提取液，浓缩提取液去除溶剂得芝麻素和芝麻林素的粗提物膏体，再采用结晶法得到纯度为97.20%的芝麻素和含量为63.96%的芝麻林素粗品。最后，通过色谱纯化，得到纯度达97.08%的芝麻林素。本技术具有产品纯度高，操作简单、安全性强，工艺稳定性好及对芝麻油的品质保持好等优点。